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BZF1 Sprachtest
Em der Luftfahrt gibt es Regeln, Gesetze und Verordnungen. Eigentlich nichts Neues. Solange der Luftfahrer mit den Regularien keine persönlichen Probleme und Einschränkungen hat, werden diese auch in aller Regel akzeptiert.
Eine Regelung stößt jedoch auf wenig Gegenliebe, nämlich die "Verordnung zur Einführung von Nachweisen von Sprachkenntnissen für Luftfahrer".
Dieser ICAO-Standard wurde in deutsche Recht überführt und regelt zukünftig die Anforderungen e Bewerber für das BZF1 (Beschränkt gültige Sprechfunkzeugnis in Englisch).
Wer mit seinem Flugzeug das deutsche Hoheitsgebiet verlassen möchte, benötigt für einen Flug in das benachbarte Ausland mindestens das BZF1.
Die nächste Mission, die bevorsteht ist das Sprechfunkzeugnis abzulegen. Mein Fluglehrer chapéu de espelho para as crianças BZF1 zu machen. "Du willst doch hoffentlich nicht nur immer in Alemanha rum kreisen, Björn! Bitte ... Mach das BZF1! "
Nach den neuesten Regeln benötigt der Pilot für den Erwerb de BZF1 einen Nachweis, dass er der englischen Sprache mächtig ist. Em unterschiedlichen Stufen (Níveis) muss der angehende Funker Sprachtests durchführen. Die Anforderungen an den Standard-Sprachtest für das BZF1 ist "Nível 4".
Die ICAO hat die Kriterien an den Test (Teste de Proficiência em Linguagem) wie folgt definiert:
Aussprache:
Aussprache, Betonung, Sprechrhythmus e Tongebung sind von der Muttersprache e outras partes do país Adjudicação de contrato Beeinflusst, beeinträchtigen die Verständlichkeit jedoch in der überwiegenden Zahl von Fällen nicht.
Grundlegende grammatische Strukturen und Satzmuster werden kreativ verwendet und in der Regel gut beherrscht. Fehler können auftreten, insbesondere unter ungewöhnlichen oder unerwarteten Umständen, beeinträchtigen jedoch nur manchmal den Aussagegehalt.
Wortschatz:
Umfang und Genauigkeit des Wortschatzes é uma organização que se dedica à produção e à comercialização de produtos alimentares, assim como à produção e ao comércio de produtos alimentares. Themen wirkungsvoll zu äußern. Der Bewerber kann häufig erfolgreich umschreiben, vor allem, wen Vokabular bei ungewöhnlichen oder unerwarteten Umständen fehlt.
Sprachgewandtheit:
Der Bewerber spricht zusammenhängend e em angemessener Geschwindigkeit. Es kann gelegentlich zu einem Abreviatura da Redeflusses beim Übergang von eingeübter oder phrasenhafter Rede zu spontanem Gespräch kommen. Matrizes atrás de morrer Verständigung jedoch nicht. Er kann eingeschränkt Bindewörter und Wörter, die eine Auffassung im Gespräch unterstreichen (Diskursmarker), verwenden. Vom Bewerber verwendete Füllwörter
Lenken nicht ab.
Verständnis:
Der Bewerber derteht überwiegend richten bei allgemeinen, konkreten und arbeitsbezogenen Os autores, na acepção do artigo 4.o do Regimento, referem-se às disposições do presente regulamento. Wenn der Bewerber einem sprachlichen oder situationsgebundenen Problema e outras informações relativas aos produtos que se destinam a este fabrico.
Verhalten im Gespräch:
Die Antworten erfolgen in der Regel unmittelbar e sind angemessen und aussagekräftig. Der Bewerber kann im Gespräch einen Gedankenaustausch einleiten und aufrechterhalten, auch im Fall eines unerwarteten Geschehens. Der Bewerber, Alemanha, Alemanha, Alemanha, Alemanha, Alemanha, Alemanha,
Die Erläuterungen stammen von BZF-Sprachtest. de
Konkret bedeutet morre também folgendes:
Möchte bzw. Muss ein Pilot englisch Funken pode ser encontrado no BZF1. Einhergehend wird ein Sprachtest durchgeführt, bei dem der Prüfling beweisen muss (em forma eine Prüfung), dass er sich englisch artikulieren kann.
Die Anforderungen an den Test kann man treinador de natação. Auf BZF-Sprachtest. de erhält man einen Überblick, welche Anforderungen in Detalhe do produto em estoque. In den FAQ's werden sehr viele Unklarheiten bezüglich des Teste de Proficiência de Idiomas geklärt.
Nun, wie kann ich mich denn auf den Test vorbereiten?
Ganz einfach. "BZF-Sprachtest" ist eine Software, provado por Language Proficiency Test vorbereitet. Zum Preis von lediglich 29,95 Euro (Versão de transferência) kann der Flugschüler sich im interaktiven Formação Sprachdateien (z. B. ATIS) anhören und somit sein Wissen zum Bestehen des Sprachtests erweitern. Zu den Audiodateien werden dann Versännisfragen in Multiple-Choice Verfahren gestellt.
Im Einzelnen werden der
ATIS - Teste
NOTAM - Teste sowie
Inglês Fachbegriffe
Treinador Mit Hilfe der Software "BFZ Sprachtest" sollte es ein leichtes sein, die Level 4 Prüfung zu bestehen.
Auf der Seite BZF-Sprachtest. de findet man zahlreiche Capturas de tela zur Software sowie weitere Informationen über den Language Proficiency Test.
Morrer software wird wohl mein Kandidat für die Vorbereitung no nível 4 Test ...
Mapeamento do sítio de ligação ao ligando num GPCR utilizando fotocrosselantes codificados geneticamente
Desenvolvemos uma abordagem geral de fotocrosselação baseada em células para investigar as interfaces de ligação necessárias para a formação de complexos de sinalização de receptores acoplados a proteínas G (GPCR). Os dois aminoácidos não-naturais fotoactiváveis p-benzoil-L-fenilalanina e p-azido-L-fenilalanina foram incorporados pela tecnologia de supressão de codão âmbar no receptor de quimiocina CXC 4 (CXCR4). Em seguida, sondamos o local de ligação do ligando para o bloqueador de co-receptor de HIV-1, T140, utilizando um análogo de T140 marcado com fluoresceína. Entre as oito posi�es de amino�idos testadas, verificou-se uma liga�o cruzada dependente da luz UV �ica especificamente entre o res�uo 189 e T140. Estes resultados são avaliados com modelação molecular utilizando a estrutura cristalina de CXCR4 ligado a CVX15.
Os GPCRs são proteínas de membrana dinâmicas que desencadeiam e regulam as vias de sinalização celular. No paradigma clássico de sinalização de GPCR, um ligando extracelular liga-se a um receptor específico para activar uma proteína G heterotrimérica. Os GPCR também activam vias de quinase dependentes de beta-arrestina (1). Para facilitar o desenvolvimento de fármacos orientados por GPCR, é importante compreender como os ligandos se ligam e modulam a estrutura e a função do GPCR. Contudo, técnicas comuns para examinar os aspectos estruturais de complexos receptor-ligando que dependem de reconstituição, incluindo cristalografia e métodos biofísicos, são limitadas pela instabilidade inerente de receptores em solução e pela necessidade de um ambiente de membrana. Nosso objetivo é desenvolver um método para estudar baixa abundância e / ou complexos de receptor transitório no ambiente da membrana celular nativa.
Uma abordagem para obter informação sobre a estrutura e a função de GPCR é interceptar um complexo receptor-ligando utilizando agentes de ligação cruzada fotoactiváveis. Embora tenha sido relatada uma série de experiências bem sucedidas de reticulação receptor-ligando, a estratégia geral de sintetizar ligandos com grupos fotoactiváveis é conceitualmente limitada e tecnicamente desafiadora (2,3). Mesmo se a reticulação puder ser conseguida, a identificação do local da reticulação é difícil e, às vezes, não é possível. Adaptamos a tecnologia de supressão do codão de paragem âmbar para incorporar foto-reticuladores de aminoácidos não naturais (UAA), p-benzoil-L-fenilalanina (BzF) e p-azido-L-fenilalanina (azF), em GPCR expressos heterologicamente em Células de mamífero (4). Esta abordagem proporciona um meio para capturar um complexo de GPCR-ligando covalente e para mapear os locais específicos no receptor que são capazes de reagir com qualquer parceiro de ligação particular de interesse. Para além da investigação de complexos conhecidos de GPCR, esta tecnologia de fotocrosselagem dirigida pode ser aplicada em princípio para identificar os ligandos nativos para GPCR órfãos e outros novos moduladores de GPCR. Aqui, mostramos como esta metodologia pode ser utilizada em células para sondar a interface de ligação entre CXCR4 e T140, um inibidor específico de CXCR4.
CXCR4 é um receptor de quimioquina que medeia a migração celular dirigida no desenvolvimento e durante a inflamação e metástase do cancro. É também conhecido por ser um co-receptor para a entrada celular de HIV-1 (5). A descoberta de que CXCL12, o ligando de quimiocina para CXCR4, bloqueia a entrada de vírus em células hospedeiras, identificou CXCR4 como um alvo potencial para inibidores de entrada de HIV-1 (6). A pequena molécula CXCR4 antagonista, AMD3100, foi a primeira prova de conceito HIV-1 entry blocker (7), o que levou ao desenvolvimento de CCR5-alvo bloqueadores de entrada (8). Os inibidores de CXCR4 também induzem a mobilização de células estaminais hematopoiéticas por interrupção da interacção entre CXCR4 e CXCL12, que é necessária para reter HSCs na medula óssea (9 x02017; 11). Por estas razões, CXCR4 é um importante alvo terapêutico para o tratamento do câncer e do HIV.
T140, um 14-resíduo cíclico peptídeo CXCR4 antagonista, blocos HIV-1 entrada (12). Utilizamos o complexo CXCR4-T140 para validar uma tecnologia de reticulação específica do local para identificar interfaces de ligação de GPCR-ligando. Os modelos complexos CXCR4-T140 anteriores foram desenvolvidos utilizando mutagénese e técnicas de reticulação, que incluíram a reticulação química e a fotocrossulação utilizando um análogo T140 contendo BzF. Estas estratégias requereram a digestão de CXCR4 para determinar o local no receptor que estava covalentemente ligado ao análogo de T140 (13. 14). Estas experiências foram apenas capazes de resolver um fragmento peptídico de CXCR4 que estava ligado a T140. Os modelos complexos CXCR4-T140 derivados destes estudos diferem da estrutura cristalina de CXCR4 ligado a CVX15, um péptido de 16 resíduos com elevada homologia com T140 (15). A diferença entre os modelos complexos CXCR4-T140 e a estrutura cristalina do complexo CXCR4-CVX15 resulta da incapacidade de técnicas de reticulação anteriores para identificar o local exacto em CXCR4 que reticulou com T140. Pretendeu-se desenvolver uma tecnologia de fotocrosselação dirigida ao local para prever modelos mais precisos de complexos de GPCR-ligando mesmo na ausência de estruturas cristalinas disponíveis.
A tecnologia de reticulação dirigida ao local depende de um método de detecção específico e sensível para identificar ambos os parceiros de ligação no complexo reticulado. Nós realizamos isto unindo uma única etiqueta reagente de anticorpo em cada componente complexo. CXCR4 contém um marcador epitópico C9 terminal para o mAb 1D4 e T140 é marcado com fluoresceína (Figura 1a). O marcador de fluoresce�a �utilizado para detec�o espec�ica por an�ise de imunotransfer�cia utilizando um anticorpo anti-fluoresce�a. A fluoresceína foi directamente conjugada a Lys8 em T140, que não interfere com a ligação a CXCR4 (16, 17). Assim, a fluoresceína-T140 (FL-T140) é um ligando adequado para validar a aplicação da tecnologia de reticulação dirigida ao local.
Fotocrosselação de mutantes CXCR4 UAA a FL-T140. (A) Estrutura química de FL-T140. (B) Esquema CXCR4 destacando locais importantes para a ligação de T140 (verde) como determinado por varrimento de alanina (13) e posições onde foi incorporada uma SAU (laranja). .
Em primeiro lugar, para optimizar as condições de reticulação e detecção do complexo FL-T140 / CXCR4, utilizou-se um análogo T140 contendo fluoresceína e BzF na posição 10 (FL-T140-BzF). Foi referido que este derivado T140 reticula-se a CXCR4 e serve como um controlo positivo (18). Demonstrou-se também que FL-T140-BzF reticula especificamente a CXCR4 em cultura de células. As células HEK293T transfectadas com CXCR4 foram incubadas com FL-T140-BzF antes da exposição à luz UV. Após exposição UV, as células foram solubilizadas em detergente e CXCR4 foi imunopurificado a partir do lisado utilizando pérolas de sefarose conjugadas com o mAb 1D4. Uma imunotransferência das amostras purificadas mostrou uma banda dependente do tratamento com UV na mancha anti-fluoresceína na massa molecular do receptor (Figura S1 da Informação de Suporte). Isto indica a existência de um complexo covalente entre FL-T140-BzF e CXCR4, o qual não foi detectado se estava presente um excesso de 100 vezes de T140 não marcado. Adicionalmente, não foi detectada qualquer ligação cruzada em células não transfectadas ou a CCR5, outro receptor de quimiocina com elevada homologia com CXCR4, demonstrando a especificidade de T140 para CXCR4. A fracção de fluoresceína também provou ser uma marca de detecção específica e sensível numa imunotransferência utilizando um anticorpo policlonal anti-fluoresceína.
Para as experiências de reticulação específicas do local a partir do lado do receptor, os resíduos em CXCR4 foram escolhidos para substituição com uma UAA de fotocrosselação com base em dados de modelação bioquímica e molecular previamente relatados. O esquema CXCR4 mostra os locais que, quando mutados para um Ala, causaram uma diminuição na inibição de T140 da entrada de HIV-1 (Fig. 1b) (13). Embora, em princípio, qualquer resíduo de aminoácido possa ser alvo de supressão de codão âmbar, escolhemos resíduos Phe na proximidade imediata destes locais para substituição com BzF ou azF de modo a fazer mutações que seriam menos susceptíveis de perturbar a estrutura nativa do receptor . Estes UAA foram incorporados um por um em cada posição utilizando um par de ARNt de sintase de ARNt de amino-acil azF ou azF amino-acilado e par de ARNt supressor que reconhecem um codão de paragem âmbar (UAG) no ARNm de receptor (4). A incorporação de BzF na posição do codão de paragem âmbar em CXCR4 foi confirmada por imunoblot para detectar o receptor de comprimento total (Fig. S2 das Informações de Suporte).
A introdução de SAU em GPCR altera a sequência nativa do receptor, mas a dobragem e função adequadas do receptor podem ser retidos, tal como foi relatado para a incorporação de SAU em outros GPCRs, incluindo a rodopsina e CCR5 (4, 19, 20). Para esta experiência, determinou-se se a incorporação de BzF em CXCR4 afecta a ligação a T140 examinando a eficiência de ligação cruzada de FL-T140-BzF a cada um dos mutantes contendo CxCR4 BzF. Todos os mutantes reticulados a FL-T140-BzF, indicando que T140 é capaz de se ligar às variantes CXCR4 contendo BzF (Fig. S3 das Informações de Suporte). Cada um dos mutantes CxCR4 BzF foram então testados para a ligação cruzada induzida por UV a FL-T140. Células HEK293T que expressam os mutantes CxCR4 BzF foram incubadas com FL-T140 e depois expostas à luz UV. As células foram então raspadas e solubilizadas em detergente e o lisado foi separado num gel de SDS-PAGE e sujeito a análise de imunotransferência.
Os resultados desta série de experiências mostraram uma banda positiva anti-fluoresceína na massa molecular de CXCR4 apenas quando BzF foi introduzido na posição 189 (Figura 1c e Fig. S4 das Informações de Suporte) ou quando BzF estava na posição 10 em FL - T140-BzF (Fig. 1d). Estes resultados sugerem que Phe 189 está próximo do sítio de ligação a T140, enquanto que os outros resíduos em CXCR4 examinados não são. A mesma experiência de reticulação foi também realizada na presença de um excesso de 100 vezes de T140 não marcado. Neste caso não foi detectada qualquer banda com o anticorpo anti-fluoresceína, o que demonstra a especificidade da ligação cruzada na posição 189 para T140 (Figura 1e). Os mesmos resultados foram observados com azF nos mesmos locais em CXCR4 (Figura S5 das Informações de Suporte), embora a reticulação de fundo sem tratamento com UV fosse significativamente maior quando se utilizava azF em comparação com BzF (Figura 1f). Por outro lado, uma vantagem de usar azF sobre BzF é que o tamanho da cadeia lateral é significativamente menor e menos perturbador para a estrutura nativa da proteína.
A avaliação dos nossos achados no contexto da estrutura cristalina de CXCR4 ligado a CVX15 verifica a aplicação desta tecnologia para identificar resíduos em CXCR4 que estão muito próximos do local de ligação de T140. Assumindo que T140 tem um sítio de ligação semelhante ao CVX15, Phe189 destaca-se imediatamente dos outros locais como estando dentro da distância de reticulação ao ligando (Figura 2a, b). Como a estrutura cristalina é limitada a uma única imagem estática, também realizamos modelagem computacional para prever as possíveis orientações de BzF em cada um desses locais (Figura 2c). Calculamos a distância entre o centro de massa do carbonilo reactivo em BzF ao átomo mais próximo no péptido CVX15 para cada uma das possíveis orientações de BzF em cada posição. BzF na posição 189 foi o único local a ter uma probabilidade razoavelmente elevada de estar dentro de 2 a 5 x000c5; A partir do p�tido x02017; Todos os outros pares de átomos de carbonilo-CVX15 potenciais eram superiores a 5 x 000c5; Separados (Fig. 2d). Isto concorda com outros relatos de que a distância mínima requerida para formar uma reticulação com um grupo benzofenona é de aproximadamente 3 x000c5; (21-22).
Modelação molecular de mutantes CxCR4 BzF. (A) Estrutura cristalina de CXCR4 ligada a CVX15 (ciano) com resíduos substituídos por SAU destacados em laranja (15). N-terminal do receptor é destacado em azul e desvanece-se a vermelho no C-terminal. (B) A 90x000b0; .
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